6º FICHAMENTO

Leucemia promielocítica aguda: caracterização de alterações cromossômicas por citogenética tradicional e molecular (FISH)

Sagrillo, M.R. ; Cardoso, S.H. ; Silva, L.R.J. ; Graça, C.H.N. ; Ferreira, E. ; Hamerschlak, N.; Guerra, J.C.C. ; Bacal, N.S. ; Andrade, J.A.D. ; Borovik, C.L. ; Leucemia promielocítica aguda: caracterização de alterações cromossômicas por citogenética tradicional e molecular (FISH) ; Rev. bras. hematol. hemoter.     Ano 2005; nº27; vol. 2; pag.94-101.

“Estudos de marcadores de superfície mostram que as

células da LPA têm um padrão distinto quando comparado

a outras LMAs. Ocorre alta expressão de antígenos mielomonocíticos(CD13, CD15 e CD33) e ausência de expressão

de antígenos monocíticos (CD14, incluindo My4, Leu M3 e

Mo2) e HLA-DR.” (p.94)

“Na maioria dos casos, os pacientes apresentam sintomas

relacionados à anemia, trombocitopenia, organomegalia

e distúrbios da coagulação.8 A primeira manifestação clínica

em LPA é a leucopenia e na variante da LPA é a leucocitose.9

Outras características menos freqüentes são observadas em

15% a 20% dos pacientes e infiltração no sistema nervoso

central e na pele são achados raros.” (p.95)

“Utilizando a técnica de FISH pode ser aplicada para determinar

a origem clonal das leucemias, monitoramento da eficácia da

terapia no tratamento, detectar a presença de doença residual

mínima seguindo a terapia, identificar recaída da doença,

detectar anomalias cromossômicas numéricas, bem como

amplificação e deleção de genes.” (p.95)

“Para obtenção de cromossomos metafásicos em amostra

de medula óssea, utilizaram-se os procedimentos técnicos

tradicionais. Resumidamente, as amostras foram semeadas

em meio de cultura (RPMI 1640-Gibco/ MEM alfa-Gibco/ Soro

Fetal Bovino-Gibco), incubadas por 24 a 48 horas a 37ºC e

submetidas a tratamento com colchicina, hipotônica e fixação.

Em seguida o material foi pingado sobre lâminas.” (p.95)

“De acordo com os resultados obtidos através da

hibridização das sondas gênicas em amostra de indivíduos

normais (controle negativo), foram considerados como positivos,

isto é, com a t(15;17), os casos que apresentaram mais

de 10% dos núcleos ou metáfases com um sinal verde, um

sinal vermelho e um sinal verde/vermelho coincidentes.” (p.96)

“Resultou também que a análisepor FISH foi possível nas dez amostras que não apresentaram células em metáfase e em nove foram observados sinais compatíveis com a fusão PML/RAR. Em quatro casos comcariótipo normal, a análise por FISH confirmou a ausência dorearranjo citogenético e, em dois casos com anomalias confirmadas.” (p.96)

“Em nosso meio, a análise citogenética em pacientes

com suspeita de leucemias com o objetivo

clínico-terapêutico vem evoluindo exponencialmente

no decorrer da última década. De fato, enquanto

seis casos com suspeita de LPA foram encaminhados

no intervalo de dois anos e meio (1993 a 1996), durante o ano de 2002 realizamos estudo citogenético em treze casos. Interessante notar que Chaufaille et al (2001)19 selecionaram 13 pacientes

com LPA no período de 1996 a 1999 e 42 pacientes

quando esse período se estende de 1997 a 2003.” (p.97)

“Em nossa amostra, a análise cromossômica

foi possível em 37 casos, dos quais 23 (62%) apresentaram

a t(15;17). Quando incluímos a análise

por FISH dos dez casos que não apresentaram

metáfases, a freqüência do rearranjo PML/RARé

de 72.3% (34 dos 47 casos).” (p.98)

“De fato, em três casos de

nossa amostra, a t(15;17) só foi observada durante

a revisão das fotos ou imagens digitalizadas. Por

outro lado, as células que entram em divisão durante

a cultura podem não ser derivadas dos

promielócitos anormais, não contendo, portanto, a

alteração cromossômica.” (p.98)

“A análise citogenética clássica ou molecular realizada

em 13 pacientes durante o acompanhamento terapêutico permitiu

a detecção de recaída em sistema nervoso central (SNC)

em um paciente. Neste caso, a análise por FISH em amostra

de líquido cefalorraquidiano mostrou sinais compatíveis com

a fusão em mais de 90% das células, enquanto a análise por

PCR em amostra de sangue periférico revelou-se normal. Vinte

e nove dias após este último exame, o teste de FISH em

amostra de medula óssea mostrou sinais compatíveis com a

fusão PML/RARem 15% das células, confirmando uma recaída

sistêmica.” (p.100)

“Foi concluído que, quando aplicada a técnica de

FISH nos casos que não apresentaram metáfases adequadas,

esta freqüência aumenta para 72,3%. A presença de alterações

cromossômicas adicionais ou complexas foi observada

em 15,8% dos casos. Interessante notar que, em nossa

amostra, em 10% dos casos encaminhados com suspeita de

LPA, a análise citogenética molecular afastou a presença do

rearranjo PML/RARa.” (p.100)

“E que o método de FISH tem se tornado rotina na prática

clínica para confirmar alterações cromossômicas específicas

e definir alterações mesmo quando a análise clássica não

apresenta resultados satisfatórios. A análise por FISH pode ser realizada em diferentes tecidos e, por ser um método quantitativo,permite inclusive a detecção da recaída da doença.”(p.100)